本发明公开了一种长波长荧光探针及其制备方法和应用。将 1,3,5,7-四甲基-8-苯基-（2’-硝基）-二氟化硼二甲基吡咯与苯甲醛进行反应，生成 3,5-二苯乙烯基较大的共轭体系，然后用锌粉将-NO2 还原成-NH2，然后与马来酸酐进行加成反应，再与乙酸酐反应得到长波长荧光探针 1,7-二甲基-3,5-二苯乙烯基-8-苯基-（2’-马来酰亚胺）-二氟化硼二吡咯甲烷。本发明的制备方法简单，制备的长波长荧光探针受环境 pH 值影响小，对巯基化合物选择性好、灵敏度高，该荧光探针自身荧光强度很弱，与巯基反应后荧光强度增强，可用于巯基化合物的检测，对生物体损伤较小，因而在生物组织和细胞荧光成像等方面具有广阔的应用前景。